Проекты

Проект РНФ «Пути фосфорилирования CD45 ассоциированного протеина (CD45-AP) и его роль в процессах активации лимфоцитов человека».

Руководитель: А.В. Филатов

    Фосфатаза CD45 контролирует в лимфоцитах уровень фосфорилирования ряда рецепторов и сигнальных молекул и таким образом является важным регулятором процесса активации лимфоцитов. Однако что управляет активностью самого CD45 остается невыясненным до настоящего времени. На роль регулятора может претендовать так называемый «CD45 ассоциированный протеин» (CD45-AP). Этот белок образует надмолекулярный комплекс не только с CD45, но также взаимодействует с корецептором CD4 и киназой Lck. Имеются веские основания полагать, что белок CD45-AP выполняет в клетке какие-то важные, но пока неизвестные функции. Прежде всего, сама ассоциация CD45-AP с CD45, CD4 и Lck очевидно не является случайной, а отражает тесные взаимодействия между этими молекулами. Во-вторых, известно, что белок CD45-AP может фосфорилироваться, а это является указанием на его возможную регуляторную роль белка CD45-AP. В третьих, степень его фосфорилирования зависит от активации клетки. Целью проекта является выяснение функции молекулы CD45-AP.

Протеин CD45-AP не принадлежит ни к одному известному семейству белков и не имеет гомологов. Доменная организация этого белка неизвестна, а функция не определена, поэтому в данном исследовании придется решать абсолютно новые научные задачи.

Проект РНФ «Поиск новых факторов рестрикции ВИЧ-1, ограничивающих репликацию вируса в условиях его межклеточной трансмиссии, путем скрининга библиотеки нокаутов GeCKO».

Руководитель: Д.В. Мазуров

    Изучение факторов рестрикции ВИЧ важно для понимания эволюции врожденной невосприимчивости к ретровирусам. Известно, что ВИЧ не размножается ни в мышах, ни в обезьянах, что обеспечивается множеством факторов естественной невосприимчивости клеток к вирусу. У человека также включаются механизмы клеточной резистентности к ВИЧ, однако вирус с помощью своих вспомогательных белков эффективно выключает данные механизмы. Тот факт, что ВИЧ на начальных стадиях заражения человека размножается в лимфоузлах, где формируется множество контактов между иммунными клетками, указывает на то, что межклеточная трансмиссия вируса играет первостепенную роль в заражении Т-клеток. В рамках проекта планируется провести поиск и обнаружить новые факторы рестрикции, противодействующие размножению ВИЧ в данных условиях, а также вскрыть механизм их действия на вирус. Это позволит глубже понять патогенез СПИДа на ранних стадиях заражения и выработать новую стратегию усиления естественной резистентности к ВИЧ.

Проект РФФИ «Создание аденовирусного вектора на основе нуклеазы Cas9, гидовой РНК и донорской ДНК для эффективного редактирования генома человека».

Руководитель: Д.В. Мазуров

   Целью проекта является поиск путей повышения эффективности гомологичной рекомбинации (HR), индуцированной двухспиральным разрывом ДНК. Планируется проверить гипотезу усиления рекомбинации в результате целенаправленной доставки донорской ДНК к месту репарации геномной ДНК. Для этого гидовая РНК будет модифицирована путем присоединения с 5’- или 3’-конца короткой области гомологии с донорской ДНК. Это вероятно будет способствовать образованию комплекса, состоящего из донорской ДНК, гидовой РНК и нуклеазы Cas9 и усилению гомологичной рекомбинации (HR). Кроме того, будет определена оптимальная длина донорсокой ДНК, соответствующая наиболее высокому уровню рекомбинации. Уровень HR будет оцениваться по степени репарации мутированного гена-репортера gfp-turbo, клеточная модель которого будет также создана. Так как наиболее эффективным и безопасным способом доставки генов в первичные клетки человека считаются аденовирусные векторы, то на следующем этапе экспрессионные кассеты с нуклеазой Cas9, модифицированной гидовой РНК и донорской ДНК будут собраны в промежуточном векторе и затем клонированы в конечный вектор Ad5. Полученные с помощью вектора аденовирусные частицы будут тестированы сначала в модельном эксперименте на клеточных линиях с дефектным геном-репортером, а в конечном итоге на стволовых клетках крови пуповины. В случае успешного тестирования метода in vitro его можно будет испытать в клинической практике для эффективной коррекции моногенных заболеваний человека таких например, как гемофилия, тяжелый комбинированный Х-сцепленный иммунодефицит человека и пр.

Реклама